События Нового Завета, которые происходили после Распятия Христа, нашли отражение в мировом искусстве в двух наиболее распространенных сюжетах — «Снятие с креста» и «Положение во гроб».
Сюжетной основой картины В.П. Верещагина стал момент, редко встречающийся в живописи — перенесение тела Христа после снятия Его с креста.

В своей картине «Ночь на Голгофе» Верещагин обратился к самому трагическому евангельскому сюжету, к теме Распятия и погребения Христа-Спасителя. Художник объединил на полотне одновременно две сцены.

В левой, затемненной части композиции на высоком каменистом уступе возвышаются три креста, погруженные в атмосферу холодной лунной ночи.

Художник использует необычный ракурс, линия горизонта расположена довольно низко, зритель воспринимает происходящее сверху, наблюдает за разворачивающимися грандиозными событиями. Крест, находящийся в центре уже пуст. К нему приставлена высокая лестница.

Кресты стоят на безжизненной каменной скале, которая словно парит над городом.
В правой части, изображена удаляющаяся погребальная процессия.

Один из ее участников несет на руках безжизненное тело Христа, бережно поддерживаемое с двух сторон его учениками: Никодимом и Иосифом Аримафейским. Процессию сопровождают жены — Мария Клеопова и Мария Магдалина, помогающие приготовить тело к погребению. Божия Матерь в синем хитоне следует вместе с Иоанном Богословом, единственным из апостолов, присутствующим и скорбящим рядом со Спасителем во время Распятия.

Другая жена, в белом одеянии страдальчески заламывает руки у ног Учителя. Замыкает печальное шествие одинокая согбенная фигура, полностью закутанная в длинный плащ. Группу людей объединяет яркий свет горящего факела, освещающего дорогу путникам.

Вдали виден купол и стены Иерусалимского храма, погруженный в тяжелый сон город освещен жидким лунным светом, пробивающимся из-за туч.

Холодный колорит произведения, растрескавшаяся земля Голгофы, нависшие тучи над городом вторят ужасу и холоду той ночи.

О людской трусости и предательстве напоминает белая накидка, изображенная на переднем плане картины. Она оставлена в спешке бежавшими с горы людьми, наблюдавшими за казнью Спасителя и насмехающимися над Ним.

Но когда грянул гром и сотряслась от ужаса земля и разодралась завеса в иерусалимском храме, они в страхе бежали прочь. И лишь избранные ученики остались со своим Учителем и тайно сняв тело Его с Креста решили его захоронить, перенеся в пещеру.

Картина была написана в 1869 году. Несколькими годами раньше, в 1863 году художник отправился в пансионерскую поездку по Европе, где изучал и копировал картины старых мастеров.

Возвратившись через три года в Петербург, Верещагин представил в Академию отчет в виде написанных картин: «Святой Григорий Великий проклинает умершего монаха за нарушение обета бессеребрия», «Свидание заключённого со своим семейством», «Ночь на Голгофе», «Молитва святой Анны, матери пророка Самуила».

За свои работы Василий Верещагин удостаивается многих наград, но самой большой наградой для художника стало его назначение на должность профессора Академии художеств.